潔凈室中浮游菌的檢測標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法

1局限性

本限度劃分了醫(yī)藥業(yè)無菌室和潔凈區(qū)中浮游菌的檢測標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法。

本限度適用醫(yī)藥業(yè)無菌室和潔凈區(qū)，無菌室或部分空氣過濾地區(qū)（包含清潔事兒臺）的浮游菌的測驗和條件的認(rèn)證。

2引入限度：GB/T16293.2010

藥物生產(chǎn)制造整治標(biāo)準(zhǔn)（1998修定）附則。

潔凈度等級

4檢測方法

4.1方法摘要

本標(biāo)本采集接受的形式是記數(shù)濃度值法。即根據(jù)互聯(lián)網(wǎng)懸游在空氣中的潛在性顆粒于專業(yè)的培養(yǎng)基（挑選 能印證其可以適用微生物菌種生長發(fā)育的培養(yǎng)基），經(jīng)多個時間和適宜的生長發(fā)育標(biāo)準(zhǔn)下讓其滋長到由此可見菌落計數(shù)，以分辨該潔室的細(xì)菌濃度值。

4.2員工的主要職責(zé)及學(xué)習(xí)培訓(xùn)

GMP無菌潔凈車間的檢測員工應(yīng)舉辦本專業(yè)的專業(yè)培訓(xùn)并得到相應(yīng)的條件后才氣才氣實行對無菌室檢測的崗位職責(zé)，在其中包含涉及到的衛(wèi)生保健知識和基礎(chǔ)的微生物菌種專業(yè)知識。

無菌室的檢測員工應(yīng)挑選 與生產(chǎn)制造實際操作的氣體潔凈度等級規(guī)定相切合的衣著方法，外邊的衣服褲子不可以帶到100000級以上的地區(qū)。

4.3儀器設(shè)備、防具和培養(yǎng)基

挑選 適宜的浮游菌采樣器，包含接受隔膜真空泵的抽氣泵，較低的氣旋流動速度和很大的取樣總流量，以確保培養(yǎng)基外邊的水漫衍被烘干。

本檢測必須具有儀器設(shè)備、防具和培養(yǎng)基如下所示：

a)浮游菌采樣器；

b)培養(yǎng)皿；

c)髙壓消毒鍋；

d)培養(yǎng)基；

e)控溫培養(yǎng)箱；

4.4浮游菌采樣器基本原理

浮游菌采樣器一樣通常接受碰撞法原理，可分成縫隙式采樣器、離心式風(fēng)機(jī)或針眼式采樣器。縫隙式采樣器由內(nèi)部結(jié)構(gòu)離心風(fēng)機(jī)將氣旋吸進(jìn)，根據(jù)采樣器的縫隙式平板電腦，將收集氣體噴出并撞到遲緩的平板電腦培養(yǎng)基外邊，粘附的活微生物菌種顆粒經(jīng)培養(yǎng)后產(chǎn)生菌體。

4.5檢測關(guān)鍵點

4.5.1務(wù)必依據(jù)設(shè)備的計量檢定周期時間，按時對測試設(shè)備作計量檢定。應(yīng)應(yīng)用計量檢定及格，并且應(yīng)用有效期限內(nèi)的儀器設(shè)備。

4.5.2測試設(shè)備未進(jìn)到被測地區(qū)時，若務(wù)必，則先清洗外邊吧，或在回應(yīng)的無菌室內(nèi)提前準(zhǔn)備和儲放（用愛惜罩或別的適度地罩殼愛惜儀器設(shè)備）。

4.5.3在100級無菌室內(nèi)拿紙時，上邊應(yīng)蒙上一張全透明不沾塵的包裹在物，在100級的無菌室內(nèi)不能用簽字筆的橡皮擦。

4.5.4應(yīng)用測試設(shè)備時要嚴(yán)苛根聽使用說明實際操作。

4.5.4.1儀器設(shè)備啟動，加熱到牢固后，即可按使用說明書的劃分對儀器設(shè)備舉辦校準(zhǔn)，與此同時查驗取樣總流量，并憑據(jù)取樣量設(shè)準(zhǔn)時間。

4.5.4.2取樣口需要用應(yīng)用有利于消毒殺菌及有機(jī)化學(xué)特性牢固的材料生產(chǎn)制造。

4.5.4.3取樣管禁止漏水，內(nèi)腔應(yīng)滑潤。

4.5.4.4取樣管的尺寸應(yīng)憑據(jù)測量點的相對高度定，只要減少彎折。

4.6培養(yǎng)皿

4.6.1一樣通常接受φ90mm×15mm規(guī)格型號的培養(yǎng)皿?？蓱{據(jù)所采用采樣器挑選 適宜的培養(yǎng)皿。

4.6.2離心式風(fēng)機(jī)采樣器接受專用型的固型培養(yǎng)條

4.7培養(yǎng)基

黃豆酪胚盤瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培育基（SDA）或別的用戶認(rèn)同并簡歷證的培養(yǎng)基。

4.8控溫培養(yǎng)箱

務(wù)必按時對控溫培養(yǎng)箱舉辦驗證

4.9測試流程；

4.9.1檢測前儀器設(shè)備、培養(yǎng)皿外邊務(wù)必嚴(yán)苛消毒殺菌。

4.9.1.1采樣器進(jìn)到被測屋子前先用消毒房間的消毒液殺菌，用以100級無菌室的采樣器

宜事先放到被測屋子里。

4.9.1.2用消毒液擦干凈培養(yǎng)皿的外外邊。

4.9.1.3取樣前，先用消毒液消毒殺菌采樣器的機(jī)蓋、輪盤及其外罩的內(nèi)外邊，取樣竣事，再用消毒液輕輕地噴出外罩的內(nèi)部和輪盤。

4.9.1.4取樣口及采樣管，應(yīng)用前務(wù)必高溫滅菌。如用消毒液對取樣管的外墻及內(nèi)腔舉辦消毒殺菌時，應(yīng)將管內(nèi)的殘余液扔掉并晾曬。

4.9.1.5取樣者應(yīng)衣著與被測清潔地區(qū)回應(yīng)的事兒服，在輪盤上放進(jìn)或獲得培養(yǎng)皿前，兩手用消毒液消毒殺菌或帶無菌手套實際操作。

4.9.1.6取樣儀器設(shè)備經(jīng)消毒殺菌后先不放進(jìn)培養(yǎng)皿，打開浮游菌采樣器，使儀器設(shè)備中的殘留消毒液揮發(fā)，時間不少于5min，并查驗總流量并憑據(jù)取樣量調(diào)節(jié)設(shè)準(zhǔn)時間。

4.9.1.7關(guān)掉蜉蝣采樣器，放進(jìn)培養(yǎng)皿，蓋緊外蓋。

4.9.1.8置取樣口于采樣點后，打開浮游菌采樣器舉辦取樣。

4.10培養(yǎng)

4.10.1全部取樣竣事后，將培養(yǎng)皿倒放置控溫培養(yǎng)箱中培育。

4.10.2接受黃豆酪胚盤瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配置的培養(yǎng)經(jīng)取樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培育，時間不能小于2d；接受沙氏培養(yǎng)基(SDA)配置的培養(yǎng)皿經(jīng)取樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培育，時間不少于5d。

4.10.3每次培養(yǎng)基應(yīng)該有對比實驗，磨煉培養(yǎng)基自身是不是環(huán)境污染?？擅看芜x中3只培養(yǎng)皿作對比培養(yǎng)。

4.11菌落計數(shù)

4.11.1用眼睛對培養(yǎng)皿上任何的菌體立即記數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，隨后用5～10倍高倍放大鏡查驗，有無忽略。

4.11.2若平板電腦上面有2個或2個以上的菌體重合，可辯解時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.12重視事宜

4.12.1應(yīng)用前要認(rèn)真仔細(xì)每一個培養(yǎng)皿品質(zhì)，培養(yǎng)基及培育皿有質(zhì)變、損壞或環(huán)境污染的不能用應(yīng)用的。

4.12.2對培養(yǎng)基、培育標(biāo)準(zhǔn)以及他主要參數(shù)作詳盡記錄。

4.12.3因為病菌品種繁多，差別甚大，記數(shù)時一樣平時用電子散射光于培養(yǎng)皿面或真面細(xì)心調(diào)查，不必有忽略計培養(yǎng)皿邊沿生長發(fā)育的菌體，并需要菌菌體或培養(yǎng)基沉積的物差別，必須時要高倍顯微鏡辨別。

5檢測標(biāo)準(zhǔn)

5.1檢測標(biāo)準(zhǔn)

在檢測前要，要對無潔凈室有關(guān)主要參數(shù)舉辦事先檢測，這類測試可能給予檢測飄浮顆粒的自然環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)，例如：這類事先檢測或可包含：

a)溫度和空氣濕度的檢測。無菌室的溫度和空氣濕度應(yīng)與其說生產(chǎn)制造及加工工藝規(guī)定相適

應(yīng)（無特別要求時，溫控在18℃～26℃，空氣濕度操縱在45%～65%中間為宜）。與此同時滿

足測試設(shè)備的應(yīng)用局限性；

b)房間內(nèi)送排風(fēng)量或風(fēng)力的測驗的檢測，或壓力差的檢測；

c)高效送風(fēng)口的泄漏檢測

5.2測試狀態(tài)

靜態(tài)數(shù)據(jù)和信息二種情況均可舉辦檢測。

靜態(tài)數(shù)據(jù)檢測時，房間內(nèi)檢測員工不可超過2人

浮游菌檢測前,被測量無菌室(區(qū))由客戶決定是不是必須事先消毒殺菌.

浮游菌檢測時要標(biāo)出檢測時需接受的情況和房間內(nèi)檢測員工數(shù)。

5.3檢測時間

5.3.1在空態(tài)或靜態(tài)數(shù)據(jù)a檢測時，對單邊流無菌室來講，檢測宜在凈化室內(nèi)空氣調(diào)理系統(tǒng)軟件正常的運轉(zhuǎn)時間不少于10min后最開始。對非單方面流無菌室，檢測宜在凈化設(shè)備正常的運轉(zhuǎn)時間不少于30min后最開始。在靜態(tài)數(shù)據(jù)b檢測時，對單邊流清潔是（區(qū)），檢測宜在生產(chǎn)加工實際操作員工撤出當(dāng)場并經(jīng)過10min臭氧消毒后最開始；；對非單邊無菌室，檢測宜在生產(chǎn)加工實際操作員工撤出當(dāng)場并經(jīng)過20min臭氧消毒后最開始。

5.3.2在動態(tài)性檢測時，則須記錄生產(chǎn)制造最開始的時間及其檢測時間。

5.4.浮游菌濃度值的籌算

5.4.1取樣點數(shù)量以及布署

5.4.1.1至少取樣點數(shù)量

浮游菌的取樣點部位可參考GB/T16292-2010

a）事兒區(qū)測量點部位距地0.8～1.5m上下（稍高于事人情世故）。

b）正壓送風(fēng)口測量點部位擺脫排風(fēng)面30cm上下。

c）可在重要武器裝備或重要事兒流動性局限性處增加測量點。

5.4.2最少取樣量

浮游菌每一次最少取樣量見表1。

表1最少取樣量

5.4.3取樣頻次

每一個取樣點一樣平時取樣一次。

5.4.4取樣重視事宜

5.4.4.1針對單邊流無菌室或正壓送風(fēng)口，采樣器取樣口朝應(yīng)正對著氣旋偏重；針對非單方面流無菌室，取樣口往上。

5.4.4.2布署取樣點時，最少應(yīng)只要繞開細(xì)顆粒物較密集的回風(fēng)管道。

5.4.4.3取樣時，檢測員工應(yīng)立在取樣口的低處側(cè)，并只要少行走。

5.4.4.4接受一切對策避免取樣過程的環(huán)境污染和其它很有可能對樣版的環(huán)境污染。

5.4.4.5培養(yǎng)皿在用以查驗時，為阻攔培養(yǎng)皿運送或挪動過程導(dǎo)致的危害，宜與此同時舉辦陰性對照實驗，每一次或各個地區(qū)取1個對比皿，與取樣皿同法實際操作但不可外露取樣皿，隨后與采集后的培養(yǎng)皿（TSA或SDA）一起放進(jìn)培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，實際效果應(yīng)無菌檢測落生長發(fā)育。

5.5記錄

檢測敘述中應(yīng)包含以下幾點

a)被試者的命名和詳細(xì)地址，檢測日期；

b)檢測根據(jù)

c)試無菌室的水平部位（必須時標(biāo)明鄰近地區(qū)平面圖部位）；

d)相關(guān)測試設(shè)備以及檢測方法的外貌：包含接口測試標(biāo)準(zhǔn)，取樣點數(shù)量及部署圖，檢測頻次，取樣總流量，或很有可能具有的檢測方法的獲得，測試設(shè)備的計量檢定資格證書等；若為動態(tài)性檢測，則還應(yīng)記錄當(dāng)場實際操作員工數(shù)量及部位，當(dāng)場運行武器裝備和數(shù)量和部位；

e)實際效果：包含全部統(tǒng)計分析籌算材料。

5.6實際效果籌算

5.6.1用記數(shù)方法得到每個培養(yǎng)皿的菌體數(shù)。

5.6.2每一個測量點的浮游菌均值濃度值的籌算，見式（1）。

均值濃度值（個/m3）=菌體數(shù)/取樣量（1）

例1：某測量點取樣量為400L，菌體數(shù)為1，則：

均值濃度值=1/0.4=2.5個/m3

例2：某測量點取樣量為2m3，菌體數(shù)為3，則：

均值濃度值=3/2=1.5個/m3

5.7實際效果鑒定

5.7.1每一個測量點的浮游菌均值濃度值務(wù)必小于所選中的鑒定限度中有關(guān)病菌濃度值的界限。

5.7.2在靜態(tài)數(shù)據(jù)檢測時，若某測量點的浮游菌均值濃度值超越鑒定限度，則應(yīng)再次取樣2次，兩次檢測實際效果均及格才氣判為相符合。

5.8一樣平時監(jiān)管

針對浮游菌的監(jiān)管，宜設(shè)置糾偏裝置程度和警示程度沿單一偏重呈平行面流線型并且與氣旋偏重豎直的橫斷面優(yōu)點速的氣旋，以確保無菌室的細(xì)菌濃度值遭受操縱。應(yīng)按時以查驗微生物菌種負(fù)載及其消毒液的法律效力，并不是作趨向分析。靜態(tài)數(shù)據(jù)和信息的監(jiān)管都能夠接受該方法。

針對浮游菌的采樣頻率次，若是涌起以下情況應(yīng)考慮應(yīng)改動，在評定下列情況，也應(yīng)明確別的項目的檢驗次數(shù)：

持續(xù)超越糾偏裝置和警示程度；

歇工時間比預(yù)估拓寬；

生產(chǎn)制造時期，空氣凈化設(shè)備舉辦一切重要的檢修；

常操做記錄播映出共性的數(shù)據(jù)信息；

消毒殺菌技術(shù)規(guī)范的更改；

生物入侵等；

當(dāng)生產(chǎn)制造武器裝備有重要檢修或增加武器裝備時；

當(dāng)無菌室構(gòu)造地區(qū)漫衍有重要變更時。